## 人前列腺癌细胞VCAP培养说明书

### 一、细胞培养条件

细胞的培养需要严格控制环境条件，包括温度、二氧化碳浓度等，以确保细胞的正常生长和发育。

### 二、细胞收到后处理

收到细胞后，应尽快对其进行处理。将细胞培养瓶用75%酒精喷洒消毒后，置于超净台内进行无菌操作。然后将细胞瓶放置于37℃、5% CO2的培养箱内静置3-4小时，以便稳定细胞状态。在显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片进行保存（建议分别拍摄40x、100x、200x的图像）。前三天的照片将作为重要的售后依据，如未提供照片则默认收到状态良好。在传代后，建议一瓶继续使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的培养基，以便进行对比培养。在换液后，一定要将瓶盖拧松。

### 三、细胞培养步骤

a、细胞传代：当细胞汇合度未超过80%时，将培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基放置于37℃、5% CO2的培养箱中继续培养。如果细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养液，使用不含钙、镁的PBS对细胞进行1-2次洗涤。

2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃的培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况，待细胞大部分变圆并脱落后，迅速将其取回工作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。

3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，将悬液转移至15ml离心管中，在1000 RPM下离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml的完全培养基重悬。

4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，然后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中进行培养。

b、细胞冻存：1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗一次；2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液以终止消化，再轻轻吹打细胞使其脱落，转移悬液至15ml离心管中，在1000 RPM下离心5分钟；3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml的无血清冻存液（如雅吉生物货号：C7001），混匀后加入冻存管中；4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若后期需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c、细胞复苏：1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速放入37℃水浴中解冻，直至无结晶后用75%酒精擦拭冻存管外壁；2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，在1000 RPM下离心5分钟；3. 弃去上清，加入5ml完全培养基重悬，然后接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养；4. 次日更换为新鲜的完全培养基继续培养。

### 四、注意事项

对于一些细胞贴壁不牢的情况，在运输过程中容易出现细胞脱落，这是正常现象。如脱离较多，可以将培养瓶所有培养液收集至离心管，进行离心并收集上清作过渡培养，再进行后续处理。

### 五、售后条款

1）细胞出现问题，可重新发货的情况及判定标准：

1. 在运输途中出现的细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等情况，均可重发；

2. 若细胞受到污染，请在收到产品48小时内提供真实实验结果，经核实后予以重发；

3. 常温发货的细胞若在静置24小时后，或者干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内绝大多数细胞未存活（需提供真实的细胞状态照片），进行重发；

4. 若干冰冻存发货的细胞复苏24小时后或常温发货细胞静置4小时且未开封后出现污染，予以重发；

5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内提供真实实验结果，通过台盼蓝染色法验证细胞活力，经过核实后重发；

6. 收到细胞当天及第2、3天务必拍照，若3天内未告知，将视为产品合格。若在4-7天内出现问题时，需提供收到细胞前3天的照片及出现问题时的照片和操作步骤，与技术人员沟通后由技术人员判定责任，予以重发。双方责任可协商处理或按合同价的50%收费重发。

2）细胞出现问题，不予重发的情况：

1. 由客户造成的细胞污染，不重发；

2. 客户不正确操作导致细胞状态不佳，不重发；

3. 非本库推荐的细胞培养体系造成的状态不佳，不重发；

4. 若未提供细胞培养前3天的照片，细胞状态不良，不重发；

5. 细胞在培养时经其它处理，不重发；

6. 收到细胞后2天内未告知的不予重发；

7. 视具体情况而定。

在细胞培养过程中，选择合适的操作步骤非常重要，遵循上述说明能够有效提高细胞的成功培养率。选择[人生就是博-尊龙凯时]，让您的研究更加顺利。