### 人小细胞肺癌细胞DMS114培养指导

#### 一、细胞培养条件

细胞名称：人小细胞肺癌细胞DMS114
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P/S
传代方法：建议第一次传代比例为1:2。更换培养基的时间为每2天一次。
备注：建议使用无菌离心管收集培养基，用于后续对比培养。如对比培养效果不理想，建议直接购买我们的完全培养基。

#### 二、细胞处理方法

收到细胞后，待细胞健康生长后，灌满完全培养液并封好瓶口是最佳运输方式。收到细胞后，用75%酒精喷洒整个细胞瓶并进行消毒，随后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放置于37℃，5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态。随后，通过显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片进行保存（建议40x、100x、200x各一张）。前三天的照片是售后重要依据，若未提供照片则默认细胞状态良好。建议传代后，一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养，更换培养基后请松开瓶盖。

#### 三、细胞培养步骤

**a、细胞传代：**
若细胞汇合度未超过80%，收集培养液至离心管中，留5ml完全培养基于37℃，5% CO2孵箱中培养。若细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，放置在37℃培养箱中消化1-2分钟，根据显微镜观察细胞状态，若细胞大部分变圆并脱落，迅速轻敲培养瓶，并加入5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，将悬液转移至15ml离心管中，以1000rpm离心5分钟，弃去上清，重悬于1-2ml完全培养基中。
4. 按1:2的比例进行传代（分为两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃，5% CO2的细胞培养箱中培养。

**b、细胞冻存：**
1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞变圆后加入5ml完全培养基终止消化，再轻吹使细胞脱落，将悬液转移至15ml离心管中，以1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，向沉淀中加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，若需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放超过24小时。

**c、细胞复苏：**
1. 从液氮中取出细胞冻存管（佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，随后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，重悬于5ml完全培养基中，接种至T25培养瓶，放于37℃，5% CO2细胞培养箱中继续培养。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基进行继续培养。

#### 四、注意事项

有些细胞贴壁不牢，在运输过程中可能会掉落，这是正常现象。如脱落较多，可将培养瓶中的培养液收集至离心管，1000rpm离心5分钟，获取上清用于过渡培养。然后沉淀加入胰酶1-2ml轻轻吹打并重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应，再离心，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。最后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），间补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃，5% CO2细胞培养箱中。

#### 五、售后条款

1）细胞在出现问题时的重发情况及判定标准：
- 如细胞在运输过程中遭遇损坏、丢失或泄漏等，均可申请重发。
- 对于细胞污染问题，需在收到产品48小时内提供真实实验结果，经过核实后可重发。
- 常温发货细胞在静置24小时后或干冰运输细胞复苏24小时后，如大多数细胞未存活（需提供清晰细胞状态照片），亦可申请重发。
- 细胞在复苏后24小时内或常温发货静置4小时后未开封若出现污染，可申请重发。
- 若细胞活性存在问题，请在收到产品7天内提供真实实验结果，采用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后可重发。
- 收到细胞当天及第2、3天需要拍照记录，若3天内未告知，则视为细胞状态合格。若在4-7天内出现问题，有提供前三天照片与相关操作详细步骤的，经过沟通后由技术人员判定责任，符合条件者可重发。若技术人员判定为双方承担责任的，需协商处理或按合同价的50%收取重发费用。

2）不予以重发的情况：
- 客户因自身原因导致的细胞污染将不予重发。
- 客户不当操作导致细胞状态不良的情况将不予重发。
- 使用非常规培养体系导致的细胞状态不良将不予重发。
- 未提供培养前三天照片而细胞状态不良，将不予重发。
- 细胞在培养时如经其他处理，将不予重发。
- 收到细胞后未在2天内通知相关信息的，将不予重发。
- 其他情况需视具体情况而定。

我们是人生就是博-尊龙凯时，致力于为您提供优质的细胞库存与培养服务！